M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨
M13和其它的絲狀噬菌體載體，在文庫(kù)構(gòu)建和為序列測(cè)序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用。將適量M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來(lái)源）感染的液體培養(yǎng)物離心，上清中的單鏈?zhǔn)删wDNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨
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M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨
目錄號(hào)：40211
目錄編號(hào) | 包裝單位 |
40211-50 | 50次 |
40211-100 | 100次 |
40211-200 | 200次 |
v 適用范圍：
適用于快速提取M13噬粒單鏈DNA
v 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：
試劑盒組成 | 保存 | 50次 | 100次 | 200次 |
結(jié)合液MB | 室溫 | 25ml | 50ml | 100ml |
漂洗液WB | 室溫 | 15ml | 25ml | 2×25 ml |
第一次使用前按說(shuō)明加指ding量乙醇 | ||||
洗脫緩沖液EB | 室溫 | 10ml | 20ml | 40ml |
吸附柱AC | 室溫 | 50個(gè) | 100個(gè) | 200個(gè) |
收集管（2ml） | 室溫 | 50個(gè) | 100個(gè) | 200個(gè) |
本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。
儲(chǔ)存事項(xiàng):
1. 結(jié)合液MB低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
v 產(chǎn)品介紹：
M13和其它的絲狀噬菌體載體，在文庫(kù)構(gòu)建和為序列測(cè)序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用。將適量M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來(lái)源）感染的液體培養(yǎng)物離心，上清中的單鏈?zhǔn)删wDNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈噬菌體單鏈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
v 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2. 節(jié)省時(shí)間，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在10分鐘內(nèi)完成。
3. 產(chǎn)量高，典型的產(chǎn)量800µl M13絲狀噬菌體上清可以提取3µg噬菌體單鏈DNA。
4. 多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9?？梢灾苯佑脕?lái)測(cè)序，一般典型可辨認(rèn)讀長(zhǎng)達(dá)650bp。
v 注意事項(xiàng)：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到50℃?zhèn)溆谩?/span>
3. 結(jié)合液MB含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
v 操作步驟:（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
以800μl噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清提取舉例:
提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指ding量無(wú)水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1. 將M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來(lái)源）感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體。
2. 小心取800μl上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管，加入400μl結(jié)合液MB，充分混勻。
如果使用的上清大于或者小于800μl，則結(jié)合液MB的用量需要按照比例增加或者減少。
3. 將上述混合物加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心15秒，倒掉收集管中的廢液。
吸附柱一次最多只可以容納大約700μl混合物，因此需要分次把混合物加到吸附柱內(nèi)，重復(fù)步驟3。
4. 加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄廢液。
5. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
6. 取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加60μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預(yù)熱）， 室溫放置1分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。如果想得到較多量的DNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，10,000rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于40μl，體積過(guò)小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。
7. DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。
v 附錄（M13噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清準(zhǔn)備過(guò)程）:
下面舉例說(shuō)明M13噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清準(zhǔn)備過(guò)程，詳細(xì)的M13噬菌體（或M13來(lái)源噬粒）培養(yǎng)和上清準(zhǔn)備過(guò)程請(qǐng)參見(jiàn)『分子克隆』第二版。
1. 37℃ 振搖過(guò)夜培養(yǎng)合適的噬菌體宿主菌。
2. 使用6％的過(guò)夜培養(yǎng)菌接種新鮮的LB培養(yǎng)液，37℃振搖培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。
3. 根據(jù)M13噬菌體的儲(chǔ)存液的濃度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌體來(lái)感染宿主菌。37℃振搖培養(yǎng)5-6個(gè)小時(shí)。
4. 將上面M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來(lái)源）感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體。
5. 可選步驟: 小心取1毫升上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管，重復(fù)步驟4離心5分鐘。
這步有助于去除上清中殘留的微量宿主菌RNA或者DNA。
6. 小心取800μl上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管。
7. 現(xiàn)在可以按照操作步驟提取噬菌體單鏈DNA了。
v 問(wèn)題與解決方法:
問(wèn)題 | 評(píng)論與建議 |
低核酸產(chǎn)量 | *試劑盒儲(chǔ)存在非最佳條件-建議：收到試劑盒后總是存放在室溫（15℃-20℃） *緩沖液或者試劑暴露于減少它們有效性的條件下-建議：儲(chǔ)存在室溫（15℃-20℃），每次用完后立刻蓋緊蓋子，以免溶液蒸發(fā)，pH改變和污染。 *漂洗液WB中忘記加無(wú)水乙醇-建議：第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在漂洗液WB中加入指ding量無(wú)水乙醇。 *試劑和樣品沒(méi)有充分混勻-建議：加入每個(gè)試劑后都要充分混勻 *噬菌體上清滴度太低-建議：離心取噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)物上清時(shí)離心最好不要超過(guò)5分鐘，轉(zhuǎn)速不要超過(guò)12,000rpm，否則噬菌體上清也可能離心下來(lái)。重新培養(yǎng)一次噬菌體感染細(xì)菌 *洗脫效率不高-建議：確保做了步驟5，否則殘留乙醇會(huì)影響洗脫 |
DNA下游酶切 | *忘記做步驟5，乙醇抑制了酶切反應(yīng)-建議：做步驟5，然后空氣中晾幾分鐘，讓殘留乙醇揮發(fā)。 *一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來(lái)，抑制了酶切反應(yīng)-建議：將洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘，小心取上清使用 |
純化的DNA | *一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來(lái)，干擾了分光光度計(jì)讀數(shù)-建議：將洗脫的回收DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘，小心取上清使用。 |
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